MolBiol.ru > Методы > Nest. deletions > С помощью Exo III/MB nuclease | |
|
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ ·
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|
Получение серийных делеций с помощью Exo III/MB nuclease
проверить используемые рестриктазы на отсутствие ник-активности; резанная pDNA 0.2µg, * 0.2µg 3kb фрагмента => ~0.1pmol одного конца, т.е. 2u Exo III на точку (пересчёт веса в моли для ДНК на странице "Нуклеотиды, нуклеиновые кислоты"); Заполнение 5'-выступающих концов тиопроизводными |
Смотри также: /ссылки на сетевые ресурсы/
|
а) молекула pDNA линеаризуется таким образом, что векторный конец оказывается защищённым от действия ExoIII (либо 4х членным 3'-выступающим концом, либо заполненным тионуклеотидами 5'-выступающим), а конец вставки - нет. г) самолигирование, трансформация. п. 1. п. 2. п. 5. п. 8.
п. 9. п. 10. п. 13. п. 17. |
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ ·
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|