MolBiol.ru > Методы > Разное > Измерение концентрации на спектрофотометре | |
|
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ ·
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|
Спектрофотометрическое измерение концентрации ДНК(РНК)
Измерение концентрации DNA/RNA Если для анализа 1µl образца разбавляется в 130µl буфера, то коэффициент пересчета K1:130OD260 в µg:
* - для олигонуклеотидов коэффициент сильно зависит от состава. Если совсем строго: {20mM Na фосфат, 0.1M NaCl}. Такие низкосолевые буферы как Tris 10-100mM, pH7.5-9.0; KHPO4100mM, pH8.2, дают очень сходные результаты. Измерения в воде приводят к отклонениям до 14% и заниженному A260/A280. Иван Миколаенко (Johns Hopkins University) прислал вырезку из инструкции к спектрофотометру "SPECTRAmax", где приводятся следующие коэффициенты для ДНК (в зависимости от растворителя):
Измерение концентрации олигонуклеотидов OD - единица измерения количества олигонуклеотидов, соответствует количеству, которое в 1ml на пути 1см дает А260=1 (вес может находится в пределах 20-33µg в зависимости от состава олигонуклеотида. Обычно он ~33µg). C [µmol/ml] = OD/l*Eолигонуклеотида Eолигонуклеотида= сумме всех(Eнуклеотидов) l - длина опт. пути в кювете ([l]=cm) C [µmol/ml] = C [mM]
Для кювет стандартной длины (1cm) формулу можно переписать как: C [mM] = OD/E
RNA - преимущественно одноцепочечная, а одноцепочечные нуклеиновые кислоты связывают EtBr существенно слабее (например, полоса 5S RNA, присутствующей в 4х кратном избытке относительно pDNA, выглядит на форезе в 2-3 раза слабее, чем полоса pDNA); |
Смотри также: /ссылки на сетевые ресурсы/
|
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ ·
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|