Medien, Vitamine, etc | Praktische Molekularbiologie

Medien

LB, LTB

pH 7.0; p=1.024

		Stamm.	100ml	150ml	200ml	300ml	600ml	750ml
1.	Bactotryptone	fest	1g	1.5g	2.0g	3.0g	6.0g	7.5g
2.	Bacto Yeast extr.	fest	0.5g	0.75g	1.0g	1.5g	3.0g	3.75g
3.	NaCl	fest	1.0g	1.5g	2.0g	3.0g	6.0g	7.5g
4.	H₂O	mQ	95.3g	143g	190.7g	286g	572g	715g
5.	agar top	fest	0.65g	0.98g	1.3g	1.95g	3.90g	4.88g
6.	agar bot.	fest	1.5g	2.3g	3.0g	4.5g	9.0g	11.3g
7.	NaOH	10N	16.7µl	25µl	33.4µl	50µl	100µl	125µl
8.	MgSO₄	1M	1ml	1.5ml	2.0ml	3.0ml	6.0ml	7.5ml

LTB: p.1, 3, 4, 7, 8.
LB: p.1, 2, 3, 4, 7.
LB/Mg: p.1, 2, 3, 4, 7, 8.

es ist ratsam den Agar nach dem Autoklavieren zu mischen. Andernfalls wird er sich als heterogene Substanz (mit viel größerer Dichte am Boden) verfestigen.

LB (low salt)

Für ein Medium mit Zeocin pH 7.0

	Stamm.	100ml	150ml	200ml	300ml	600ml	750ml
Bactotryptone	fest	1g	1.5g	2.0g	3.0g	6.0g	7.5g
Bacto Yeast extr.	fest	0.5g	0.75g	1.0g	1.5g	3.,0g	3.75g
NaCl	fest	0.5g	0.75g	1.0g	1.5g	3.,0g	3.75g
H₂O	mQ	95.3g	143g	190.7g	286g	572g	715g
NaOH	10N	16.7µl	25µl	33.4µl	50µl	100µl	125µl

10x

	Konz.	Stamm.	50ml	75ml	100ml
Na₂HPO₄x 12 H₂O	48mM	358.14g/M	8.60g	12.90g	17.19g
KH₂PO₄	22mM	136.09g/M	1.50g	2.25g	3.00g
NaCl	8.5mM	58.44g/M	0.25g	0.38g	0.50g
NH₄Cl	18.7mM	53/49g/M	0.50g	0.75g	1.00g

M9:

	Konz.	Stamm.	100ml	150ml	200ml
M9	1x	10x	10ml	15ml	20ml
Glucose	0.4%	10%	4ml	6ml	8ml
H₂O		cňĺp.	86ml	129ml	172ml

fügen Sie folgende zusätzlichen Komponenten hinzu:

thiamine	1mM	1M	100µl	150µl	200µl
MgSO₄	1mM	1M	100µl	150µl	200µl
CaCl₂	0.1mM	1M	10µl	15µl	20µl

für Petrischalen-Medium ist es notwendig den Agargehalt auf 3% zu setzen.

NZY

	1 L	200ml
NZ amine	10g	2g
NaCl	5g	1g
Bacto Yeast extr.	5g	1g
MgSO₄xH₂O	2g	0.4g
H₂O	950ml	190ml

SOC, SOB

(lagern bei NT).

	Stamm.	200ml	400ml
Bactotryptone		4.0g	8.0g
Bacto Yeast extr.		1.1g	2.2g
NaCl	5M	0.4ml	0.8ml
KCl	1M	2.0ml	4ml
H₂O		~196ml	~391ml

nach dem Autoklavieren auf <60^oC zu kühlen;
hinzugeben

0.01V 2M Mg²⁺{= 1M MgCl₂ + 1M MgSO₄}
0.01V 2M glucose;

0.2µm steril Filtrieren;
bei –20^oC, (-70^oC) in kleinen Aliquots lagern.

SOB - dieselbe Lösung ohne Glukose.

Terrific Broth

pH 7.0

	100ml	150ml	200ml	300ml	667ml
Bactotryptone	1.2g	1.8g	2.4g	3.6g	8.0g
Bacto Yeast extr.	2.4g	3.6g	4.8g	7.2g	16.0g
Glycerol	0.4ml 0.504g	0.6ml 0.757g	0.8ml 1.009g	1.2ml 1.513g	2.667ml 3.362g
H₂O to V	90ml	135ml	180ml	270ml	600ml
nach dem Autoklavieren hinzugeben:
KPO₄, pH7.0 1.0M	10ml	15ml	20ml	30ml	66.7ml

YENB

pH 7.5: (salzfreies Medium für das Ansetzen von elektro-kompetenen Zellen).

	Konz.	Stamm.	0.45 L	0.5 L	0.9 L	1.0 L
Bacto Yeast extr.	0.75%	fest	3.4g	3.75g	6.75g	7.5g
Nutrient Broth	0.8%	fest	3.6g	4.0g	7.2g	8.0g
NaOH		10N	~243 µl	~270 µl	~490 µl	~540 µl

2 YT

	%(w/w)	200ml	1L
Bactotryptone	1.6	3.2g	16g
Bacto Yeast extr.	1.0	2g	10g
NaCl	0.5	1g	5g
H₂O	96.9	193.8ml	969ml

Andere Substanzen

IPTG

C₆H₁₈O₅S; Mw=238.3g/M;

	Konz.	1ml	5ml	10ml
IPTG	200mg/ml	0.2g	1.0g	2.0g

steril Filtrieren;

trockenes Pulver bei 4^oC (trocken); -20^oC (Lösung in H₂O), lagern;

- für Plasmide – pro 80mm Petrischale ~4µl,
- für M13 – pro 3ml top Agar ~1-4µl.

X-Gal

C₁₄H₁₅BrClNO₆ Mw= 408g/M;

	Konz.	1ml	5ml	10ml
X-Gal	20mg/ml (2%)	20mg	0.1g	0.2g

das trockene Pulver bei 4^oC im Dunkeln lagern; Lösung bei –20^oC im Dunkeln lagern (in DMFA (oder DMSO mit dem gleichen Ergebnis)) lagern.

- für Plasmide – pro 80mm Petrischale 40µl,
- für M13 – pro 3ml Top Agar 40µl.

Glucose

C₆H₁₂O₆ Mw=180.16;

	Konz.	Stamm.	5ml	10ml	50ml	100ml	150ml	200ml
C₆H₁₂O₆	1M	180g/M	0.90g	1.80g	9.01g	18.02g	27.03g	36.03g

steril Filtrieren.

Maltose.

100x Lösung für Bakteriophage lambda Medium;

	Konz.	Stamm.	10ml	50ml	100ml
Maltose	20%	fest	2g	10g	20g

steril Filtrieren.

Thiamine.

Vitamin B₁ Aneurine; C₁₂H₁₇ClN₄OSxHCl; Mw=337.3g/M;

	Konz.	Stamm.	1ml	5ml	10ml	25ml
C₁₂H₁₇ClN₄OSxHCl	1M	337.3g/M	0.337g	1.69g	3.37g	8.43g

steril Filtrieren.