Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Western blotting -- comments to a permanent page of the site --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Тема связана с: Western
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


страницы (5): < 1 2 3 4 > »  
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 24.04.2007 11:48     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #51 множественное цитирование

А когда нанесла экстрагированный протеин, оказалось, что с концентрации 250 nM и меньше,ответа нет, чувстительность слабая. Количество белка, которое нагружаю - 30-35 mkg довольно прилично, почему не работает GAPDH в этих условиях - не понятно.

Из ваших докладов не ясно, работают ли первые антитела на GAPDH в доте, по сравнению с чем чувствительность меньше. Как вы делали дот на GAPDH, что было материалом для пробы, какой раствор использовали для нанесения на мембрану материала.

Одно очевидно, после экстрагирования антитела фермент не видят, вот вам и ответ - меняйте первые антитела. Они у вас кстати поли- или моноклоны и от какой фирмы. Но есть нюансы например, когда вы делали дот, раствор для нанесения не позволил связаться GAPDH с мембраной или экстрагирующий буфер разрушает АГ-детерминанту GAPDH, но понять это из ваших докладов не возможно.

Возможно, что фирма не виновата, особенно если это моноклоны, ибо моноклоны часто не узнают белка на блоте после денатурации на форезе или при экстракции.

-- а вот как с точностью,

А если подумать?
Гость
IP-штамп: frpSEtPSk3fY.
гость



 прочитанное сообщение 25.04.2007 15:35     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #52 множественное цитирование

Антитела на GAPDH - monocloni Санта Круз, в доте первые антитела на GAPDH работают, но картинку я получила инвертированную. места нанесения GAPDH светлые, весь блот черный. Буфер для отмывки антител - трис, NaCl,твин 20 0,3.
В следующем опыте я нанесла экстрагированный белок на блот - максимальная концентрация - 250 нано грамм , раствор для отмывки тотже: трис, NaCl,твин 20 - 0,3%.затем нанесла антитела первые - GAPDH в той концентрации, в которой они работали на дот блот,затем вторые, и не получила никакого ответа.
Возможно белок денатурирован.
Спасибо за коментарии

и вторые антитеда
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 25.04.2007 17:30     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #53 множественное цитирование

-Антитела на GAPDH - monocloni Санта Круз, в доте первые антитела на GAPDH работают, но картинку я получила инвертированную. места нанесения GAPDH светлые, весь блот черный. Буфер для отмывки антител - трис, NaCl,твин 20 0,3.

Если Моноклоны есть вероятность, что они в вестерне не работают. Надо запросить Санта Кроуз по этому поводу.

--в доте первые антитела на GAPDH работают, но картинку я получила инвертированную. места нанесения GAPDH светлые, весь блот черный. Буфер для отмывки антител - трис, NaCl,твин 20 0,3.

Это как раз больше похоже не на работу, а на отсутствие забивки и неработающие антитела. При чем если раствор, в котором вы наносили пробу с GAPDH на дот, близок физиологическому, то похоже что эти антитела не будут работать и в имуноприципитации и почти верняк не будут работать в ИФА.

Собирайте результаты и шлите рекламации санте.
Участник оффлайн! Glebber
Постоянный участник
London, UK



 прочитанное сообщение 25.04.2007 19:13     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #54 множественное цитирование

(Гость @ 25.04.2007 14:35)
Ссылка на исходное сообщение  Антитела на GAPDH - monocloni Санта Круз, в доте первые антитела на GAPDH работают, но картинку я получила инвертированную. места нанесения GAPDH  светлые, весь блот черный. Буфер для отмывки антител - трис, NaCl,твин 20 0,3.


Q. Why do I get a negative image on my Western blots? The bands are either white, clear or outlined in black with a low to moderate gray background across the blot.

A. Excess reporter enzyme (horseradish peroxidase) in a small area can rapidly exhaust its substrate in the short time it takes to move the membrane from the detection reagents to film (or a CCD camera or scanner).
You may be able to visualize your bands by returning the membrane to the detection reagent solutions for 5 – 10 minutes and then repeating the detection. The long-term solution is to reduce the secondary antibody dilution (or whichever antibody is conjugated to the reporter enzyme) or to load less protein onto the gel, thereby decreasing the amount of target.

Click here for more information about Western Blotting

http://www5.gelifesciences.com/aptrix/upp0...&moduleid=46948
Участник оффлайн! Ольга Л.




 прочитанное сообщение 14.05.2007 17:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #55 множественное цитирование

mesentsev
Постоянный участник



  17.05.2006 18:24                    URL #23 

--------------------------------------------------------------------------------


Например, для goat anti-rabbit поизводства Jackson Immunoresearch (Cat# 111-035-003) подходит 0.5% Carnation Instant Nonfat Dry milk fortified with vitamins A & D. Не самое лучшее молоко, но в отличие от того что продает Fisher или Bio-Rad оно раз в пять или шесть, по-моему, дешевле и вполне работоспособно, если его фильтрануть через бумажный фильтр.


Подскажите, пожалуйста, а где вы покупаете это молоко Carnation? Если Вы в России, конечно.
И какое еще сухое молоко можно использовать, чтобы было дешево и сердито?

Заранее спасибо!
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 14.05.2007 18:17     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #56 множественное цитирование

Дешево и сердито это купи молоко и отцентрифугируй. Ну это вооще экстрим.

А так любое сухое молко в котором содержание жира на сухой вес не превышает 2.5%. В Рассейских Гостах такое молоко должно встречаться, его технологи еще называют сухой обрат. Импортное молко для культуристок и др. фитнес-телок бывает с содержанием жира 0.5% - это ваще супер и растворяется хорошо. Рассейское обычно продают на каких-нибудь пищевых развалах в ларьках, фасованное в ПЭ мешки в ручную. Из-за истекшего срока хранения или неправильного хранения может быть прокисшим. Так что рекомендую его пробовать, прежде чем покупать и растворяется оно хуже чем иноземное.
Еще рассеское можно пошукать по пищевым(кондитерские фабрики, фабрики мороженного,майонезные производства итд) и молочным комбинатам, если знакомые там работают - можно спросить.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Ольга Л.
Гость
IP-штамп: frOPgq3SsgFsA
гость



 прочитанное сообщение 24.05.2007 16:05     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #57 множественное цитирование

О, тут я вижу буфер переноса совсем даже не Товбиновский используется, да? Т.е. даже ну вобще не он, а какая-то, наверное, очень продвинутая модификация его... и pH у него наверно выше 10, ну может это и к луччему, больше basic proteins перенесётся... надо же, а мы всё по-старинке, классическим товбином переносим, а тут такой прогресс уже, век живи - век учись..
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  25.05.2007 14:14     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #58 множественное цитирование

http://www.nature.com/nmeth/journal/v2/n1/...meth0105-79.pdf
Гость
IP-штамп: frwHCzM7irGkI
гость



 прочитанное сообщение 05.12.2007 16:14     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #59 множественное цитирование

Здравствуйте, коллеги!
Првый раз ставлю блоттинг, на оборудовании Bio-Rad. Маленький белок, 10кДа. Есть какие-то особенности, подводные камни. Может кто знает?
Наталья
guest: Гость
IP-штамп: frtqj.kwixseM
гость



 прочитанное сообщение 05.12.2007 18:30     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #60 множественное цитирование

Нет никаких особенностей (имела дело с белком массой 8 кДа) - 10% ПААГ.
Guest
IP-штамп: fr0CXODQM332o
гость



 прочитанное сообщение 05.12.2007 18:52     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #61 множественное цитирование

Может, лучше 15% ПААГ взять?Получше полоска сконцентрируется.
На что блотить будете (PVDF, нитроцеллюлоза)?
Гость
IP-штамп: frwHCzM7irGkI
гость



 прочитанное сообщение 06.12.2007 10:42     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #62 множественное цитирование

Собираюсь делать 15% гель и переносить на нитроцеллюлозу. Держу в руках ячейку для транс-блотинга и не знаю сколько TS буфера сколько буфера лить. До покрытия рамок? Это получается не "сухой перенос", а мокрый.
Guest
IP-штамп: fr0CXODQM332o
гость



 прочитанное сообщение 06.12.2007 19:41     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #63 множественное цитирование

http://www.bio-rad.com/cmc_upload/0/000/01...0/M1703930E.pdf

если вы первый раз ставите блоттинг, то прочитайте это (думаю, у вас эта камера. или другая?)
конечно, до покрытия рамок. зачем сухой перенос?
Guest
IP-штамп: fr0CXODQM332o
гость



 прочитанное сообщение 06.12.2007 19:42     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #64 множественное цитирование

то есть такая ссылка
www.bio-rad.com/cmc_upload/0/000/013/280/M1703930E.pdf
Участник оффлайн! Era2007




 прочитанное сообщение 27.02.2008 16:10     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #65 множественное цитирование

Добрый день!
Уважаемые форумчане, ответьте мне, пожалуйста, на такой вопрос: какой эндогенный контроль лучше использовать при детекции уровня экспрессии белков, скажем, у больных и у здоровых индивидов? И нужен ли такой контроль? Заранее спасибо за ответ.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 27.02.2008 18:11     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #66 множественное цитирование

Я всегда выравнивал по общему белку. Это и есть контроль.

Можете вырвнивать по гистонам(если найдете к ним антитела), по GAPDH, по актину.

Все еще зависит от того какая ткань, сколько и какого в ней ВКМ, какое отношение объема цитоплазмы к ядру и тд итп. Какой белок ядерный, цитоплазматический, внеклеточнный.

Проще всего почитать статьи про данный конкретный белок и его уровень и способы его измерения. Там можно найти много полезного.
Гость
IP-штамп: frYFKPXNgytn6
гость



 прочитанное сообщение 28.02.2008 01:59     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #67 множественное цитирование

Услышал про методику Western'а, где перенос на мембрану не требуется - как я понял, окраска антителами произовится прямо в геле. Вроде бы это какой-то kit. Поискал в сети, но ничего не нашел.

Может кто-нибудь об этом тоже что-то слышал и подскажет, где искать?

Спасибо!
Guest
IP-штамп: frd2SkIM.hhaA
гость



 прочитанное сообщение 28.02.2008 02:05     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #68 множественное цитирование

Pierce делает такие

http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=01041115
Участник оффлайн! akimovster
Постоянный участник
Новосибирск



 прочитанное сообщение 11.07.2008 09:09     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #69 множественное цитирование

Друзья! Нет ли какой нибудь альтернативы метанолу и сухому молоку?
Участник оффлайн! akimovster
Постоянный участник
Новосибирск



 прочитанное сообщение 11.07.2008 10:15     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #70 множественное цитирование

Друзья! Какова роль метанола в этом методе?
Участник оффлайн! Ale-x
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.07.2008 11:41     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #71 множественное цитирование

(akimovster @ 11.07.2008 09:09)
Ссылка на исходное сообщение  Друзья! Нет ли какой нибудь альтернативы метанолу и сухому молоку?


Этанол, 40%, и БСА.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 11.07.2008 12:49     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #72 множественное цитирование

Метанол можно заменить этанолом. Сух молоко казеином желатином альбумином и даже твином 20 или Тритоном Х-100.
Участник оффлайн! Ale-x
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.07.2008 13:09     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #73 множественное цитирование

(guest: ммм @ 11.07.2008 12:49)
Ссылка на исходное сообщение  Метанол можно заменить этанолом. Сух молоко казеином желатином...


Да, коктейль "White Russian" и лимонное желе на закусь smile.gif
Участник оффлайн! akimovster
Постоянный участник
Новосибирск



 прочитанное сообщение 14.07.2008 10:06     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #74 множественное цитирование

Этанол, 40%, и БСА.
БСА в какой коцентрации? и Вчём растворять?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 14.07.2008 16:51     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #75 множественное цитирование

--БСА в какой коцентрации? и Вчём растворять?
А молоко в чем растворяете?
Гость
IP-штамп: frr9CTKwsZV0s
гость



 прочитанное сообщение 15.07.2008 11:31     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #76 множественное цитирование

А почему этанола 40%, а не 20, как метанола?
Guest
IP-штамп: frZTsnoh7XPl6
гость



 прочитанное сообщение 16.07.2008 17:16     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #77 множественное цитирование

Что такое БСА ? бычий сывороточный альбумин ?
Участник оффлайн! akimovster
Постоянный участник
Новосибирск



 прочитанное сообщение 23.07.2008 05:58     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #78 множественное цитирование

Да,БСА - бычий сывороточный альбумин.
Участник оффлайн! akimovster
Постоянный участник
Новосибирск



 прочитанное сообщение 23.07.2008 06:00     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #79 множественное цитирование

"Этанол, 40%, и БСА."
Кто проверял?
Этанол точно работает в 40% концентрации?
Участник оффлайн! Ale-x
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 23.07.2008 10:25     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #80 множественное цитирование

(akimovster @ 23.07.2008 06:00)
Ссылка на исходное сообщение  "Этанол, 40%, и БСА."
Кто проверял?
Этанол точно работает в 40% концентрации?


Всю жизнь так работаю.
Участник оффлайн! Ale-x
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 23.07.2008 10:26     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #81 множественное цитирование

(akimovster @ 14.07.2008 10:06)
Ссылка на исходное сообщение  Этанол, 40%, и БСА.
БСА в какой коцентрации? и Вчём растворять?


БСА - в TBS или PBS, лучше с твином
Участник оффлайн! akimovster
Постоянный участник
Новосибирск



 прочитанное сообщение 24.07.2008 07:35     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #82 множественное цитирование

"Этанол точно работает в 40% концентрации. Всю жизнь так работаю."
То есть, мембрану предварительно вымачиваем в этаноле, затем уравновешиваем бубером для переноса, содержащим этанол 40%? А почему так много этанола, может стоит 10%? Не будет ли проводимость буфера страдать?
Участник оффлайн! Ale-x
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 24.07.2008 12:35     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #83 множественное цитирование

(akimovster @ 24.07.2008 07:35)
Ссылка на исходное сообщение  "Этанол точно работает в 40% концентрации. Всю жизнь так работаю."
То есть, мембрану предварительно вымачиваем в этаноле, затем уравновешиваем бубером для переноса, содержащим этанол 40%? А почему так много этанола, может стоит 10%? Не будет ли проводимость буфера страдать?


Ничего не страдает, почему 40% - не знаю, люди добрые подсказали, сам не проверял. Наверное, менделеевка все-таки правильнее разведена. Мембрану вымачиваю в воде и буфером не заморачиваюсь, но думаю, что хуже не будет.
Участник оффлайн! akimovster
Постоянный участник
Новосибирск



 прочитанное сообщение 25.07.2008 05:41     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #84 множественное цитирование

"Ничего не страдает, почему 40% - не знаю, люди добрые подсказали, сам не проверял. Наверное, менделеевка все-таки правильнее разведена. Мембрану вымачиваю в воде и буфером не заморачиваюсь, но думаю, что хуже не будет."
А есть разница, какую мембрану использовать? У меня PVDF. Для неё тоже 40% этанол?
Guest
IP-штамп: frANMBFdTSq1Q
гость



 прочитанное сообщение 25.07.2008 08:19     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #85 множественное цитирование

20% этанол в буфере для электропереноса тоже вполне отлично работает. А PVDF сначала надо смочить в этаноле (70 - 96%) и далее использовать буфер с этанолом (хоть 20%, хоть 40%).
Участник оффлайн! akimovster
Постоянный участник
Новосибирск



 прочитанное сообщение 28.07.2008 07:43     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #86 множественное цитирование

"20% этанол в буфере для электропереноса тоже вполне отлично работает. А PVDF сначала надо смочить в этаноле (70 - 96%) и далее использовать буфер с этанолом (хоть 20%, хоть 40%).
"
Спасибо Вам!!!
Участник оффлайн! Pavel2
Участник



 прочитанное сообщение 12.09.2008 13:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #87 множественное цитирование

А с каким оборудованием/пластиком вы работаете при инкубации сыворотки и конъюгата? Может есть специальные ванночки?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 12.09.2008 13:38     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #88 множественное цитирование

--А с каким оборудованием/пластиком вы работаете при инкубации сыворотки и конъюгата? Может есть специальные ванночки?

Есть, но ими никто не пользуется. Хорошо идут квадратные чашки петри, круглые тоже не плохо, коробочки из под китов, коробочки из под канцелярских скрепок и бижутерии, коробочки из под предметных стекл.

А так качалка любая например от биосана или элми. Так же самодельные качалки из моторчика от КиПА( КСП(потенциометр) КСМ(мост) есть такие промышленные измерительные приборы с самописцем на ЩУПы ставят) вот этот моторчик на него(в смысле наего вал) одевается диск, который служит приводом шатуну, который качает пластину закрепленную грубо говоря как крышка на петлях. У таких качалок есть одно преимущество: они могут работать без остановки месяцами, при температуре от минус 10, до плюс 50.
А недостатки невозможность регулировать обороты и большой шум(механический редуктор).
Участник оффлайн! Pavel2
Участник



 прочитанное сообщение 12.09.2008 14:27     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #89 множественное цитирование

-Есть, но ими никто не пользуется. Хорошо идут квадратные чашки петри, круглые тоже не плохо, коробочки из под китов, коробочки из под канцелярских скрепок и бижутерии, коробочки из под предметных стекл.
Если использовать чашку петри или какую нибудь коробочку, то расход реактивов и сыворотки будет очень большим. Для IgG-иммуноблота необходимо разводить сыворотку 1:2, если мы будем использовать пластик с емкостью даже 5 мл расход сыворотки будет очень большой. А для IgE-иммуноблота разводить сыворотку и конъюгат нужно еще меньше.
Guest
IP-штамп: fr.qBeWWz8.0E
гость



 прочитанное сообщение 14.09.2008 12:11     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #90 множественное цитирование

Еще можно инкубировать в пакетиках - делать их из файлов для документов (не очень удобно, надо следить за равномерностью покрытия - с опытом приходит). Хороши также 50-мл пробирки (если мембрана узкая). Можно использовать культуральные флаконы (75-ml flask) - они плоские, объем 1 - 2 мл достаточен (при объеме флакона 75 мл).
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 14.09.2008 15:29     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #91 множественное цитирование

--Для IgG-иммуноблота необходимо разводить сыворотку 1:2, если мы будем использовать пластик с емкостью даже 5 мл расход сыворотки будет очень большой. А для IgE-иммуноблота разводить сыворотку и конъюгат нужно еще меньше.

Если б я не знал обстоятельств нашей жизни, я бы посоветовал вам с такими реактивами не работать. А купить или получить нечто более адекватное. Коньюгатов с таким разведением не бывает их просто никто не будет покупать. Сыворотки, конечно разные бывают, но все же. Такую сыворотку можно вобще не разводить, а за-азидить 0.1% азидом и пользоваться(многократно) до тех пор пока не истощится.

А еще мембрану можно порезать на дорожки из дорожек вырезать нужное место мол веса по маркеру и по пять десять штук в 24 луночном планшете клеточном качать. Или по 2-3 стрипа в фэлконовской 15 мл пробирке на ролере там мл жидкости доложно хватитть на покрытие. Если у вас несколько дорожек с одним антигеном вырезается узкий стрип по мол весу поперек дорожек и в тот же фэлкон.

Короче голь на выдумки хитра.
Участник оффлайн! светлана гырылова




 прочитанное сообщение 07.10.2008 10:53     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #92 множественное цитирование

здравствуйте! подскажите пожалуйста, как приготовить самый концентрированный агарозный гель , он мне нужен , чтобы склеить кассету для электрофореза, в процессе иммуноблоттинга. (готовый гель не подходит, я сломала кассету, теперь надо ее склеить,а потом залить в нее новый гель.)
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 07.10.2008 11:59     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #93 множественное цитирование

Агароза вас скорее всего не спасет. А что в ы сломали прокладку, заглушку, стекло.

Высокопроцентную агарозу можно получить только в автоклаве.
Гость
IP-штамп: frxTVV0Pgb/I2
гость



 прочитанное сообщение 09.10.2008 08:14     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #94 множественное цитирование

я не камеру, а кассету разломала. кассета пластиковая, то есть у меня была кассета с гелем для электрофореза готовая, но ее срок годности вышел, и гель испорчен, я кассету сломала, гель убрала, теперь надо склеить кассету , чтобы залить в нее свежий гель. вроде слышала что склеивают агарозным гелем только вот скольки процентным? и на чем на воде или буфере? пробовала делать 1.5% агар.гель на воде в микроволновке . держит плоховато.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 09.10.2008 12:53     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #95 множественное цитирование

Склейте касету циакриновым клеем хотя бы. А лучше полистиролом(материалом из которого делают культуральный пластик). Он растворяется в толуоле и хлороформе.
Гость
IP-штамп: frxTVV0Pgb/I2
гость



 прочитанное сообщение 20.10.2008 11:24     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #96 множественное цитирование

спасибо за помощь:)
Участник оффлайн! Асель Биктасова




 прочитанное сообщение 01.04.2009 10:30     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #97 множественное цитирование

Здравствуйте!!! помогите пожалуйста. Ситуация: проявляем мембраны ТМБ.все было отлично, потом резко мембраны перестали краситься, и весь раствор при этом становился синий, те окраска получилась в растворе. в чем причина? втор ат меняли на новые - не помогает. спасибо
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 01.04.2009 13:59     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #98 множественное цитирование

Вы где ТМБ взяли? Просто Тетраметилбензидин на мембрану практтически не садится. Самое простое решение перейти на ДАБ. Разбиратся в фирменных составах обеспечивающих нерастворимость ТМБ на мембране бессмыслено, ибо сотав их производитель умалчивает.

PS Возможно что-то поменялось в субстратном буфере что мешает ТМБ иммобилизоваться на мембране. Если ничего не менялось, все вопросы к производителю или просто поменять ТМБ на новый.
Участник оффлайн! Асель Биктасова




 прочитанное сообщение 02.04.2009 10:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #99 множественное цитирование

Спасибо. сначала был Хеликон, он красил мембраны, но потом стал выцветать. Заказали новый Био-рад, он вообще никак не хочет фиксироваться... простите, расшифруйте пожалуйста "ДАБ"
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 02.04.2009 11:09     Сообщение для модератора       

ДАБ 3,3' диаминобензидин.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 29.03.24 15:34
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft