Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Forum robot Постоянный участник на сервере в Москве |
|
hista |
nataly-123@list.ru Это очень важно и нужно для меня. hista. Спасибо. |
bukach Постоянный участник Geneva, Switzerland |
берете навеску Na2HPO4 м=142*0,1*V масса в граммах. растворяете ее в объеме немного меньшем V, затем берете NaOH и на рН-метре доводите рН затем доводите объем до нужного. фсе. иногда Na2HPO4 бывает в виде кристаллогидратов (на банке посмотрите)если это так, то вместо 142 в формулу нужно будет подставить мол. массу кристаллогидрата - 142+(колво молекул H20)*18 а вы уверены что вам нужет именно фосфатный буфер, а не боратный например? фосфат при 9.4 буферить не будет.
|
bukach Постоянный участник Geneva, Switzerland |
все это скинула на мейл Сообщение было отредактировано bukach - 26.05.2005 21:54 |
Oleg Klychnikov Постоянный участник Moscow/Amsterdam->Leiden |
фосфатный буфер - это паранойя! я думаю, что Редактору надо на стартовой странице привесить ссылку на "Метды приготовления Фосфатных БуферОв"
|
Oleg Klychnikov Постоянный участник Moscow/Amsterdam->Leiden |
а бУферы ну... не могу уже...
|
bukach Постоянный участник Geneva, Switzerland |
а еще ежели к названиям придираться, то и фосфатный буфер ну страсть какой сложный замутить чтоль тему в беседе с названием типа "умеете ли вы готовить фосфатный буфер"? а вообще то с такого хочется ... хрень какая то с образованием... надо с этим бороцца... за оффтопик -
|
Tom1 Постоянный участник |
|
tryptophobe Shreveport, LA |
Transfer buffer FW x20, mM 500 ml 1000 ml Bicin 163.17 500 40.79 81.59 Bis-Tris 209.24 500 52.31 104.62 EDTA*4H20 452.24 10.2 2.31 4.61 Chlorobutanol* 177.46 5.4 0.48 0.96 1x готовый transfer buffer (1 L) 20x transfer buffer - 50 ml Methanol abs. - 100 ml Вода - до 1 л *1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanol hydrate |
Гость IP-штамп: frftLGqhpFF.A гость |
Среда для заморозки клеток:(100 ml) 50 ml DMEM (containing 4.5 g/L glucose, 110 mg/L sodium pyruvate and 2 mM L-glutamine) 40 ml heat-inactivated fetal bovine serum 10 ml dimethylsulfoxide (DMSO) Filter sterilize буфер HBS: 280 mM NaCl 1.5 mM Na2HPO4 50 mM HEPES Adjust the pH to 7.10 with NaOH раствор Trypsin-EDTA: 0.53 mM EDTA 0.05% trypsin |
Гость IP-штамп: fr2TrCt5Dwfag гость |
|
Гость IP-штамп: frPlS0ztFA68w гость |
Я даже не знаю стоит ли верить тому что здесь написано... Например в таблице расчета "Смесь для окрашивания олигонуклеотидных гелей" расписаны количества реагентов на 100 ml но если все слить так как указано получится 110 ml где ошибка? Для кого это сделано... |
hemul Участник Москва |
1. Он бывает с калиевыми фосфатными солями, а бывает с натриевыми, или с теми и другими. 2. В него добавляют NaCl, а иногда KCl. 3. Добавляют ПЭГ, Tween. На что все это влияет? На что влияет концентрация буфера (кроме ионной силы)? Чем принципиально отличается PBS от Tris буфера? Зачем в буфер добавляют азид натрия NaN3? Спасибо заранее! |
ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
А кто вам сказал что это один и тот же буфер. Это слэнг в некотором смысле, обозначающий рраствор примерно изотонический физиологическому и забуференный фосфатными солями с небольшой буферной емкостью. ---Добавляют ПЭГ, Tween. Просто PBS с ПЭГ ом и Тв не бывает. Обычно пишут, что PBS с добавками того, сего, пятого. ---На что все это влияет? На такой вопрос - ответ: на все, и не на что. ---На что влияет концентрация буфера (кроме ионной силы)? От концентрации буфера зависит его емкость. ---Чем принципиально отличается PBS от Tris буфера? --"А почему вы спрашиваете?" <c> Чем принципиально отличается билистиллят от милипоровской воды? Вот например такой ответ: трис дороже раз в десять. Или трис более сладкий на вкус. 1) почитайте учебник по буферам или хотя бы вводную статью в справочнике Доусона. 2) Почитайте учебник по питательным средам для клеточных культур. После этого перезадайте свои вопросы. 3) И еще какой-нибудь мануал по имунохимии. Правильно поставленный вопрос содержит половину ответа.(по этому вопросу обратитесь к рассказу Шекли "Ответчик", кажется называется) ---Зачем в буфер добавляют азид натрия NaN3? Что бы убить того кто этим PBS будет питаться. Консервант это весьма своеобразный для лабораторного употребления тс. |
ol-ka Москва |
|
ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
|
hemul Участник Москва |
О'K, это не принципиально. Я искала методику по иммуноцитохимии, нашла энное кол-во. Во всех, понятное дело, принцип сходный, а буферы везде разные. Пытаюсь выбрать подходящий мне. --Добавляют ПЭГ, Tween. Просто PBS с ПЭГ ом и Тв не бывает. Обычно пишут, что PBS с добавками того, сего, пятого. Да. пишут. Так вот, зачем добавляют? Чтобы улучшить проникновение чего-либо куда-нибудь? Улучшают свзязывание чего-то с чем-то? ---На что влияет концентрация буфера (кроме ионной силы)? От концентрации буфера зависит его емкость. Спасибо. ---Чем принципиально отличается PBS от Tris буфера? --"А почему вы спрашиваете?" <c> Чем принципиально отличается билистиллят от милипоровской воды? Вот например такой ответ: трис дороже раз в десять. Или трис более сладкий на вкус. За ответ спасибо. Спрашиваю потому, что есть в одних вариантах метода тот, а в других другой. Надо же выбрать, на каком делать Про дистиллят, я кстати, тоже не знаю. То есть чем получение отличается знаю, а чем результат - нет. 1) почитайте учебник по буферам или хотя бы вводную статью в справочнике Доусона. 2) Почитайте учебник по питательным средам для клеточных культур. После этого перезадайте свои вопросы. 3) И еще какой-нибудь мануал по имунохимии. Правильно поставленный вопрос содержит половину ответа.(по этому вопросу обратитесь к рассказу Шекли "Ответчик", кажется называется) За советы спасибо. От ссылки на "учебник по буферам" совсем бы не отказалась ---Зачем в буфер добавляют азид натрия NaN3? Что бы убить того кто этим PBS будет питаться. Консервант это весьма своеобразный для лабораторного употребления тс. Здесь это вряд ли, т.к. буфером надо пользваться "здесь и сейчас", процедура на несколько часов. Может он (азид натрия) влиять на сохранение клеточных структур? |
ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
---Чтобы улучшить проникновение чего-либо куда-нибудь? Используют вазэлын. ---Так вот, зачем добавляют? Что бы ухудшить неспецифические белок белковые взаимодействия. ПЭГ просто это интересно(я не встречал) возможно немного увеличивает действующую концентрацию АТ. И все это можно почитать в книжке по иммунохимии. ---Надо же выбрать, на каком делать. Вы работаете в эксперементальной области, использование умозрительных заключений здесь очень ограничено, что бы их делать надо иметь большой опыт с разными препаратами и разными антигенами. А вам надо либо попробовать один вариант и если он вас не устроит искать другой, либо попробовать несколько и выбрать лучший. ---Здесь это вряд ли, т.к. буфером надо пользваться "здесь и сейчас", процедура на несколько часов. "А мужаки то не знали..."<c> Ну и че? На один препарат буфера уходит меньше 0.5мл, а делают его от 50 до 500мл за раз, шож его в помойку выливать. ---- Может он (азид натрия) влиять на сохранение клеточных структур? Ну! почитайте, как он действует на ферменты и какие и сами решите может или не может. Его действие аналогично действию цианида. ---От ссылки на "учебник по буферам" совсем бы не отказалась Любой учебник по качественному анализу для химических специальностей спасет вас. Например Алексеев(хотя формально он не для химиков) Гольбрайх практикум по неорганике и тд
|
hemul Участник Москва |
|
dm1 Постоянный участник |
|
Гость IP-штамп: frHvKmYS/aKWA гость |
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
---щелочью, его щелочью содиевой. |
alex233 |
|
Guest IP-штамп: frQ8iiE/shsPs гость |
|
Дилетантка IP-штамп: frQ8iiE/shsPs гость |
|
Aniona |
|
Dimych Постоянный участник Kr-sk - Puschino - NYS - Calgary... Круг замкнулся |
(Дилетантка @ 22.12.2006 13:55) Подскажите как приготовить раствор: в 10 mM трис-HCl буфере рН 8,0; 1,0 mM ЕДТА с 2,5%SDS и 5% меркаптоэтанола. Буду очень благодарна Смешиванием запасных растворов (исключение - меркаптоэтанол, он -чистое вещество). Берёте калькулятор в ручки (или бумагу и карандашик) и вперёд. Если не знаете, как посчитать - идите в уборщицы или в журналисты, всем будет от того благо великое, и Вам тоже. А, простите за любопытство, для чего такое офигительное количество меркаптоэтанола в растворе применяется? |
Guest IP-штамп: frACP.i4dXA/A гость |
(Dimych @ 14.01.2007 08:49) А, простите за любопытство, для чего такое офигительное количество меркаптоэтанола в растворе применяется? наверное волосы завивать
|
Дилетантка IP-штамп: frNYJZecF5GO2 гость |
|
Guest IP-штамп: frxcIGlR1Rnxc гость |
(Дилетантка @ 15.01.2007 11:41) А какой ответ Вы хотели? Ладно, так значить: Молярный Трис, рН 8 разбавить в 100 раз Полумолярный ЕДТА в пятьсот раз 10% СДС в 4 раза Меркаптоетанол.... Ну зависит от того, какие проценты Вам потребны. Впрочем, я не думаю, что при таком количестве есть существенная разница. Скажем, в 20 раз. И того на литр раствора (!): 10 мл Триса 2 мл ЕДТА 250 мл СДС 50 мл (ну если хочется масс-объёмные проценты найдите в справочнике плотность) меркаптоэтанола (Ужоссс!) Полегчало? Кушайте на здоровьице. Дело в том, барышня, что такие расчёты должны уметь делать школьники старших классов если они не из интерната для альтернативно одарённых. Если для Вас простое разбавление это великое таинство, то продолжать попросту не стоит, молекулярная биология и биохимия явно не Ваша стезя. Сами измучаетесь и окружающих изведёте.
|
Dimychch IP-штамп: frxcIGlR1Rnxc гость |
|
guest: Dimych IP-штамп: frxcIGlR1Rnxc гость |
|
Dimychchchch IP-штамп: frxcIGlR1Rnxc гость |
|
bukach Постоянный участник Geneva, Switzerland |
(Guest @ 16.01.2007 00:09) А какой ответ Вы хотели? Ладно, так значить: Молярный Трис, рН 8 разбавить в 100 раз Полегчало? Кушайте на здоровьице. и шыш после этого рН 8.0 получится. если грубите, то хотя бы ошибок не делайте при этом. Дилетантка, вопрос ваш и вправду детсадовский. но если он не отпал, пишите мне в личку. |
Дядя ФАКСер Постоянный участник Nothern Maccaronia, Ticinum |
|
bukach Постоянный участник Geneva, Switzerland |
и доводить с мэ и сдс. хи-хи. чтоб один вонял на всю лабу (а на 5%, да на мешалоччке еще и соседи придут в гости с недобрыми намерениями), а от другого электроды отмывать до посинения. так что не запутывайте деушку ) сначала трис, эдта и вода (чуть меньше, чем нужно), потом рН, потом мэ и сдс. ну и опять вода до нужного объёму. |
Dch IP-штамп: frxcIGlR1Rnxc гость |
Что хочу, то и делаю. Это не ошибка, это практика. Довольно общая. Про сдвиг рН при разведении я в курсе, равно как и про температурный сдвиг. Необходимость доведения сильно зависит от целей, с какими буфер применяется, и от того, доводили ли его те, кто методику придумал. Очень может быть, что не доводили. Я для хроматографии не довожу. Белки от этого грязнее не становятся и душа ни фига не болит. Кроме того, если девочка задаёт такие вопросы, то разницы для конечного результата вообще нет. Из неё даже лаборант не получится. А уж если докапываться до "ошИбок", то "шИш" пишется таки через И. |
bukach Постоянный участник Geneva, Switzerland |
(Dch @ 16.01.2007 03:06) если вы взялись объяснять человеку КАК сделать, то делайте это по-человечески. а с таким подходом лучше б вы просто оставили последний абзац своего поста. (Dch @ 16.01.2007 03:06) Это не ошибка, это практика. Довольно общая. Про сдвиг рН при разведении я в курсе, равно как и про температурный сдвиг. Необходимость доведения сильно зависит от целей, с какими буфер применяется, и от того, доводили ли его те, кто методику придумал. Очень может быть, что не доводили. Я для хроматографии не довожу. Белки от этого грязнее не становятся и душа ни фига не болит. если методику пишут нормальные люди, то они видят разницу между "буфер с рН 8.0, разведённый во столько то раз" или "буфер с рН 8,0". так и пишут. в вопросе было второе. потому ошибка. (Dch @ 16.01.2007 03:06) Кроме того, если девочка задаёт такие вопросы, то разницы для конечного результата вообще нет. Из неё даже лаборант не получится. А уж если докапываться до "ошИбок", то "шИш" пишется таки через И. ну нельзя так. не осуждайте. вполне возможно, что не повезло ей с учителями. может, если б ктонить ей толком один раз объяснил, как это делается, то и проблем бы не возникало. и закончим на этом. всем сорри за оффтоп. Сообщение было отредактировано bukach - 16.01.2007 04:00 |
Дилетантка IP-штамп: frNYJZecF5GO2 гость |
|
Гость IP-штамп: fr5VxSluWi21Q гость |
|
Гость IP-штамп: frQhCWJIiGAxE гость |
|
Yarl |
|
Yarl |
|
Guest IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
200mM на 1л готового раствора. |
Бору Постоянный участник Киев. обл., Украина |
|
le lapin Постоянный участник |
|
Бору Постоянный участник Киев. обл., Украина |
"The bacterial pellet was suspended in 100 mkl of TAE buffer (40 mM Tris acetate [pH 8.5]-2 mM EDTA) and mixed with 200 mkl of alkaline solution containing 3 g of SDS, 0.6 g of Trizma base (Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.), and 6.4 ml of 2 N NaOH in 100 ml of H20." Сначала забуферивают систему рН 8.5, а потом сразу же поднимают его вверх, при чем опять с испольхованием триса (только с другим названием, видимо чтобы избежать тавтологии ).... Нет чтоб написать сразу - приливаем 300 мкл трис-буфера такогото рН, с ДДС и ЕДТА концентраций соответсвующих. Еще один перл, оттудаже "The supernatant of the mixture after centrifugation at 16,000 x g for 10 min was mixed with 200 mkl of H20 and 50 mkl of 3 M sodium acetate (pH 5.2)." Спрашивается, а вода зачем? Почему не взять изначально ацетат натрия концентрации в 5 раз ниже? А 3 М раствор ацетата натрия что действительно имеет кислую реакцию, соль то вроде щелочная.... |
Гость IP-штамп: frTX1Bt2UC3vE гость |
п.5.хранить при -20C в банке тёмного стекла или завернув в фольгу божемой, божемой... мочевину при -20? или акриламид??? |
Гость IP-штамп: frDQwa9k7riYg гость |
|
Гость IP-штамп: fr5tghyqMW41o гость |
но невозможно же до такой степени упиваться собственной специфичностью!!!! к нам же начинающие совсем ходить перестанут |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |