Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Forum robot Постоянный участник на сервере в Москве |
Базовые методы работы с эукариотическими клетками. Снятие клеток с культуральных сосудов. Замораживание. Размораживание. Определение количества клеток. Транспортировка. Культуральная посуда. Приведена общая схема работы с эукариотическими клетками. Оптимальные условия, времена и концентрации для каждой конкретной клеточной линии подбираются опытным путем. |
_Ella_ IP-штамп: frftLGqhpFF.A гость |
|
Olena Bilyk |
Лена |
Guest IP-штамп: frkM0/MHHgnTA гость |
(Olena Bilyk @ 22.02.2006 22:06) Дорогие коллеги! Посоветуйте как заморозить клетки асцитической жидкости, взятые непосредственно у онкологических больных. Я первый раз с этим работаю, требуется совет. Лена Точно также, как и все остальные клетки морозят. Сходите на сайт celltransplant.ru - много спецов по этой тематике. |
Гость IP-штамп: frFSEhx7pFQBo гость |
Подскажите пожалуйста как можно быстро, дёшево и сердито убить клетки в культуре? Линия HaCaT(кератиноциты). Заранее огромное СПАСИБО |
гость: Ю IP-штамп: frn63u3Akg/ZI гость |
(Гость @ 23.02.2006 17:52)
|
Guest IP-штамп: frn63u3Akg/ZI гость |
(Гость @ 23.02.2006 17:52) Уважаемые коллеги! Подскажите пожалуйста как можно быстро, дёшево и сердито убить клетки в культуре? Линия HaCaT(кератиноциты). Заранее огромное СПАСИБО Можно использовать облучение ультрафилетом (минут 20), или митомицин С, 50 мкг/мл 1-2 час, или актиномицин Д (1-5 мкг/мл, колхицин и др клеточные яды и противоопухолевые химиопрепараты. А у меня к Вам вопрос как раздобыть клетки HaCaT? Уже давно ищу в бывшем СССР. Заранее спасибо. |
Гость IP-штамп: frw3GfipDY0Lk гость |
|
ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
Линия HaCaT(кератиноциты). НАГРЕТЬ ГРАДУСОВ ДО 50-60. поменять рН запредельно, или налить окислителя. а еще формалинчик тоже хорошо. |
bapik |
СПАСИБО. Андрей. |
Firefly76 |
|
Ksiysha |
|
Ksiysha |
(Гость @ 10.05.2006 17:59) Здравствуйте! Напишите ,пожалуйста,можно ли для снятия клеток NIH3T3 с чашки вместо трипсина использовать раствор Версена и как лучше это выполнить, чтобы получить максимально возможное количество клеток (надо для миграции)? заранее СПАСИБО. Можно и версеном, но подержать в инкубаторе придется подольше и снимать механически |
Гость IP-штамп: frGqyYT8IU7LU гость |
Посоветуйте простому генному механику... Задача - зафиксировать клетки на чашке, затем провести иммуноокрашивание рекомбинантного белка. Попробовали: фикс- 4%параформ на PBS+Tw20 0.01%, отмывка, иммуноокраш. с помощью Fab-фрагментов- POD, субстрат ТМБ. Получилось грязно, видна только внеклеточная локализауия белка. Кто-нибудь пробовал сапонин (? конц, время) для улучшения проникновения АТ в клетки? И какие субстраты лучше для такой работы (есть Fab'ы меченные АР) Спасибо кatia@ibch.ru |
guest: ммм IP-штамп: frHvyGooYAnV2 гость |
Клетки то животные или бактериальные? Если животные то можно попробовать мягкую фиксацию типа метанол уксус или 80% ацетон при этом и доступ к внутренностям клеточным открывается. Получилось грязно, видна только внеклеточная локализауия белка. Может это неспецифика? Клетки-то наверное можно отмыть как-то от внеклеточного белка перед фиксацией. --есть Fab'ы меченные АР Для такой хрени используют бром -хлор-индолил фосфат с нитросиним тетразолиевым в паре. Ну и буфер щелочной для субстрата. |
curious67 Постоянный участник |
Спасибо за ответ! Пробовала 80% ацетон и 4%парафрорм на PBS С ацетоном лучше, для параформа требуется обработка сапонином (чтобы мембраны разрушились и АТ проникли внутрь). А насчет отмывки - это не грязь и не неспецифика, белок имеет внутри- и внеклеточную локализацию (что видно на флуор. микроскопе, поскольку мы имеем дело с аналогом GFP). А субстрат у меня ТМБ. Он выцветает при хранении. Попробую этот ваш бром-хлор... Спасибо за Ваши комментарии!!! |
Guest IP-штамп: frs8D3rPK85tc гость |
(curious67 @ 18.02.2007 15:24) curious67, Вы что, пол сменили? |
curious67 Постоянный участник |
|
pchelinka Участник |
СПАСИБО. Андрей.quote] мы перевивали мышей сразу (не культивируя дополнительно) - вынутую из мышки опухоль, (асцитная или солидная), переносилась в буфер Хенкса, или в RPMI, объем которых должен быть небольшой - 1-2 ml и температуры чел тела (капля раствора на тыльной стороне руки не чувствуется). Далее концентрация клеток в растворе разводилась до 10*6 (степ) в ml и по 400-500 мкл вводилась в животное уколом в брюхо - для брюшного асцита. Для других опухолевых клеток перевиваемая концентрация может быть другая. |
Гость IP-штамп: frMBK77sTX3LI гость |
Чем принципиально отличается работа с культурами клеток насекомых, например, от культур гибридом? Мне скоро предстоит работать с первыми и хочется быть немножечко "в танке"..... Спасибо..... |
kolya1984 |
|
Bogatick о-малое Москвы |
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
Грубо! - Между субстратом и рецепторами адгезии образуются кальциевые мостики. типа СОО- +Са+ -ООС. |
Bogatick о-малое Москвы |
|
Гость IP-штамп: frvwNYUDB8Upk гость |
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
второй ставить чашку в эксикаторе в котором погасла горящая свеча(от недостатка кислорода). Гарантий никаких при любом из способов, хотя первый предпочтителней. |
Гость IP-штамп: fr3PpYUagJAXg гость |
Почему благодаря EDTA,содержащемуся в версене, клетки адгезионных культур сходят с поверхности? Почему лишение клеток двухвалентных ионов заставляет их "покидать насиженные места"? кадгерины кальций-зависимы |
Гость IP-штамп: fr3PpYUagJAXg гость |
Почему благодаря EDTA,содержащемуся в версене, клетки адгезионных культур сходят с поверхности? Почему лишение клеток двухвалентных ионов заставляет их "покидать насиженные места"? кадгерины кальций-зависимы |
Гость IP-штамп: frG/ehwVgdnf. гость |
|
polymerase |
Трансфекция эу-клеток. Почему, когда мы проводим трансфекцию одновременно двумя плазмидами, считается, что во все клетки попадают обе? Пусть создается смесь трансфекционного реагента и двух плазмид, а затем раскапывается на клетки. Тогда, теоретически, у нас будет 4 вида комплексов: агент, не захвативший ничего, агент захвативший плазмиду1, плазмиду2 и обе. И, если в плазмиды включена кднк GFP, то визуально ну ни как отличишь эти комплексы ( ну то есть светится клеточка, а какая?)! Я в тупике. |
Нора Участник |
Огромное спасибо! |
myosotica Гость IP-штамп: fra6xdMWXgbHc гость |
Подскажите пожалуйста где можно найти протокол получения подкожных человеческих фибробластов? Очень нужно :mol: |
chatter Участник |
(Гость @ 23.02.2006 18:52) Уважаемые коллеги! Подскажите пожалуйста как можно быстро, дёшево и сердито убить клетки в культуре? Линия HaCaT(кератиноциты). Заранее огромное СПАСИБО Хромпиком. |
chatter Участник |
(polymerase @ 23.01.2008 23:19) Объясните, пожалуйста. Трансфекция эу-клеток. Почему, когда мы проводим трансфекцию одновременно двумя плазмидами, считается, что во все клетки попадают обе? Пусть создается смесь трансфекционного реагента и двух плазмид, а затем раскапывается на клетки. Тогда, теоретически, у нас будет 4 вида комплексов: агент, не захвативший ничего, агент захвативший плазмиду1, плазмиду2 и обе. И, если в плазмиды включена кднк GFP, то визуально ну ни как отличишь эти комплексы ( ну то есть светится клеточка, а какая?)! Я в тупике. Один липофектаминовый комплекс включает в себя много-много плазмид. При эквимолярном соотношении векторов в смеси довольно сложно себе представить, как липофектамин матерясь ползает по пробирке, собирая исключительно GFP-вектора лишь бы вам нагадить. |
Гость IP-штамп: frDQwa9k7riYg гость |
|
Гость IP-штамп: frltbIKmJu36Q гость |
|
Guest IP-штамп: frWNOAHXr90iU гость |
(Firefly76 @ 28.11.2006 19:01) Коллеги, посоветуйте, pls, что делать, если при культивировании клеток среда (DMEM/10%CBS) быстро защелачивается (приобретает фиолетовый оттенок. Клетки пойкилотермных животных, Т=26С, посуда NUNC. CO2 инкубатора нет, но введение газа в емкость не предотвращает этот процесс. ЗАРАНЕЕ БЛАГОДАРЕН. 1. Если добавляете НЕРЕS, не добавлять. 2. Увеличить на порядок концентрацию клеток (если не слишком большая) 3. Увеличить концентрацию фетальной сыворотки (смело можно до 20%) 4. В свое время, когда у нас не было СО2 инкубатора , мы добавляли СО2 в эксикатор с помощью бытового сифона и балончиков с СО2 для сифонов (сейчас их продают для пистолетов), но добавляли каждые 6 часов и крышку эксикатора смазывали глицерином. 5. каждые 4 -6 часов менят среду культивирования на новую Успехов |
Гость IP-штамп: fr84SLI.CBe9Q гость |
|
katya-akts Участник Москва |
не могли бы Вы уточнить номер партии сыворотки, на которую такие подозрения? моя почта katya_akts{sobaka}mail.ru |
galina.glousker |
|
Гость IP-штамп: fr7Ufi3qeYVAg гость |
Подскажите, пожалуйста! Я хочу выделить белок из эндотелиальных микрочастиц плазмы крови - как можно разрушить мембрану, но так, чтобы не денатурировал белок? - Может быть, ультразвуком, но в течение какого времени? |
Гость IP-штамп: frlnAsDr.5x7A гость |
|
alsan |
|
MMM Постоянный участник |
(alsan @ 25.10.2014 21:52) Подскажите пожалуйста, как организовать работу с суспензионными культурами клеток. В каких колбах качать, какие крышки можно использовать? Или только Corning PC c вент крышкой? Если вы не собираетесь растить их мегалитрами, то подходит ЛЮБАЯ культуральная посуда для адегизионных культур. Так же можно использовать ПС чашки для бактерий. Качать в колбах низя. Они не бактерии потоки жидкости не любят. Их если в масштабах литров растят, то при ооочень медленном перемешивании в лабах обычно с помощью ролерной технологии, а в производстве в спец ферментерах. |
alsan |
|
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
|
Dr. Lektor |
Заранее благодарен. |
CowDoc Постоянный участник Middle East |
(MMM @ 26.10.2014 08:23) Качать в колбах низя. Они не бактерии потоки жидкости не любят. Их если в масштабах литров растят, то при ооочень медленном перемешивании в лабах обычно с помощью ролерной технологии, а в производстве в спец ферментерах. Не слушайте! Все зависит от вида клеток и среды. И опыта. Посмотрел бы я на вас, как бы вы [/b]очень медленно перемешивая выращивали бы простейшие BHK-21 |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |