Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Forum robot Постоянный участник на сервере в Москве |
|
Nameless Постоянный участник CA |
|
Fedo Постоянный участник Nemetchina |
|
Nameless Постоянный участник CA |
|
Nameless Постоянный участник CA |
Так что если у кого результаты не сходятся - звоните в биорад, получайте ответ - и бегом к шефу |
Guest IP-штамп: frlkSmZr37YvE гость |
|
Nameless Постоянный участник CA |
|
_enisseisk_ IP-штамп: frftLGqhpFF.A гость |
2. с нативной очисткой - тоже должно все работать, но можно при лизисе (озвучивание во льду) добавлять еще и ингибиторы протеаз, например, ФМСФ до 100 мкМ. Остальные - дело вкуса. 3. тип сорбента - тоже может иметь значение. Qiagen-овские неплохи, но и от Sigma (Ni-CAM HC) ничего. И для FPLC годится. |
serhiosus Участник Minsk |
|
Esya Постоянный участник PA, USA |
(Nameless @ 24.08.2005 15:29) Нет, вообще конечно можно и тем пользоваться, но надо чтобы имидазол в пробах был меньше 12.5 мМ или чтобы белка было очень много и мерять его макроБСА. У меня белка было немного и снимал я его в 250 мМ, поэтому и не получалось. Ага, если белок кумассей красится, то бредфорд завсегда лучше, не надо забывать, что мелочь всякая зачастую плевать на биорадовскую краску в кислоте хотела. А БСА он без претензий, все меряет и даже альбумин можно в качестве стандарта часто использовать. |
Гость IP-штамп: fr3h//j.zHZU. гость |
|
Tom1 Постоянный участник |
|
Kaa-g Участник |
|
Гость IP-штамп: fr3h//j.zHZU. гость |
Дело в том, что хроматография на Ni-NTA прошла с ДТТ и все поделилось и почистилось, но только в процессе работы колонка из зеленовато голубой превратилась в бурокоричневую, но потом при отмывке имидазолом, эта бурая окраска сошла с белком и теперь препарат белка светлокоричневый. А колонка опять нормального цвета. Разница между βмэ и ДТТ только в дополнительных SH и ОН группах следовательно и реакция ионов никеля будет с ними одинаковой??? А как же работают на Ni-NTA с белками, которым нужны ДТТ и βмэ??? |
Tom1 Постоянный участник |
|
Esya Постоянный участник PA, USA |
Еще можно TCEP - пользовать Это если никелевый сорбент пользовать, кобальтовый и МЕО плохо переносит по другим причинам. Читайте инструкцию. Сообщение было отредактировано Esya - 08.05.2007 16:05 |
bio-1985 |
|
Гость IP-штамп: frsCQkPH3djzA гость |
посмотрите на 23 стр этого протокола: |
Гость IP-штамп: frsCQkPH3djzA гость |
EDTA 1mM EGTA 0.5mM 20% glycelol, можно до 50% glycerol (тогда колонку после нанесения элюирующего буфера лучше центрифугировать). |
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |