Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Western blotting -- comments to a permanent page of the site --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Тема связана с: Western
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 03.07.2011 11:56     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Tom1 @ 03.07.2011 02:38)
Ссылка на исходное сообщение  1. для мини форезов так и остался "Био в рад"  так выпускают и другие компашки, но обычно гели заточены под собственные камеры и с собственными буферами на классическим трис-глицином.
- да, буферы "компанейские", pH в геле вроде бы пониже, чем в трис-глицине (хотя для меня это вряд ли критично) бежит быстрее... но этих фирм множество сейчас: пока рассматривал Bio-Rad, Invitrogen и Lonza, наверняка это "не полный список" - и не хочется тратить денюжку, да и время, на выяснение - кто лучше. Тем более, не исключено, что "из одной бочки льют"... smile.gif
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 03.07.2011 19:56     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail

пробовал лично все из выше перечисленных самое плохое впечатление от инвитро"...
Лонза и врад примерно одинаковы, но лонза в юсах подороже будет. гы-гы))))

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): DK.
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 04.07.2011 00:28     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Tom1 @ 03.07.2011 18:56)
Ссылка на исходное сообщение  пробовал лично все из выше перечисленных самое плохое впечатление от инвитро"...
- и именно инвитро у нас самый дорогой из всех трех smile.gif .
Tom1, а Q-dot вместо ЕСL, случаем, не пробовали? По описанию выглядит заманчиво, я попробовал - свечение есть,где надо, но чтобы добиться наилучшего результата, УФ-освещение должно быть сверху ( как у старых камер, где ТСХ смотрели smile.gif ), и система регистрации требует изменений -вот и раздумываю, стоит ли связываться, не слишком ли я резво "догоняю прогресс" smile.gif
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 04.07.2011 01:26     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail

нет сим "зверем" я не пользовался. Не возникало потребности.....
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 04.07.2011 09:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Tom1 @ 04.07.2011 00:26)
Ссылка на исходное сообщение  нет сим "зверем" я не пользовался.  Не возникало потребности.....
- у меня скорее "возникло любопытство", когда предложили "безвозмездно, т.е. задаром" попробовать: свечение яркое, не выгорает долго. Но та картинка, которую получил на УФ-иллюминаторе для этидиумбромидных гелей, была не лучше ECL. Дальше надо было усовершенствовать регистирирующую технику - но изменился проект, и я так и остался в неведении frown.gif - стоит ли игра свеч.
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.10.2011 21:24     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

После блоттинга и отмывки от Понсе блоты можно хранить довольно долго - а можно ли хранить (несколько дней) после блокировки молоком 5%? Как лучше -отмыть и оставить в "полусыром виде" в холодильнике? Или все-таки в том же блокирующем растворе?
guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость



 прочитанное сообщение 21.10.2011 04:39     Сообщение для модератора       

Можно! Можно даже высушить и через несколько лет размочить снова. Но только не со всеми белками это проходит. Несколько дней можно хранить под водой с азидом и ЭДТА.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): DK.
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 21.10.2011 18:28     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail

Предпочитаю хранить 2 способами либо завернутым в саран мокрый хранится без особых проблем до 2 месяцев. Либо сушу и храню между фильтровашками до года.
однако в обоих случаях предпочитаю делать это после блокировки, лутше БСА.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): DK.
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 22.10.2011 12:44     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Cпасибо! - еще вопрос вдогонку: я, чтобы соотнести ECL и исходный блот, по старнике делаю еще и длительную экспозицию - когда края нитроцеллюлезного блота хорошо видны (правда, все остальное гипер...). Как проще маркировать углы блота,чтобы видеть на пленке?- не дырявить же... smile.gif Биотинилированные маркеры не совсем хороши - трудно угадать в каждом случае, какая экспозиция понадобится. Просто на углы наносить пробовал конъюгат с пероксидазой, после блоттинга - неаккуратное зрелище на финише. Кажется, есть какой-то люминесцентный карандаш - но "живьем" его не видел. Какие есть варианты?
guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость



 прочитанное сообщение 22.10.2011 18:21     Сообщение для модератора       

мембрану когда кладете на пленку при красном свете обычном маркером углы отмечайте. все

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): DK.
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 22.10.2011 21:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(guest: ммм @ 22.10.2011 17:21)
Ссылка на исходное сообщение  мембрану когда кладете на пленку при красном свете обычном маркером углы отмечайте. все
- А маркер (понятно, не водорастворимый), не слезает при проявке?у нас в Ин-те для проявки пленок используется кодаковская машина: попробую - надеюсь, не перепачкаю машину smile.gif
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 22.10.2011 21:41     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Ну, понятно, насчет "испачканной машины" - шутка, но все-таки удобнее бы иметь что-то люминсцирующее в углах самого блота - не собьется при закрывании кассеты и т.п. Хотя маркер - тоже вариант.
guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость



 прочитанное сообщение 23.10.2011 08:24     Сообщение для модератора       

Господи! Из-за одной пленки машину гонять! Смех! Буржуи они и есть.
Да! Обычный маркер для надписей на стекле и пластике. Не слезет

-не собьется при закрывании кассеты и т.п.
Один кусочек малярной липкой бумажной ленты и у вас уже ничего не собьется.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): DK.
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 23.10.2011 10:56     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(guest: ммм @ 23.10.2011 07:24)
Ссылка на исходное сообщение  Господи! Из-за одной пленки машину гонять! Смех! Буржуи они и есть.
- обижаете smile.gif , зачем же из-за одной! одной пленкой и мне-то ограничиться не удается, а там гоняет весь Институт. Буржуи и подсчитали, ч то технологичнее и дешевле выделить одну фотокомнату и поставить одну машину, чем каждой из дюжины лаботаторий выделять площадь на свою фотокомнату и заводить свое, хоть и простенькое, но свое, оборудование и реагенты. Так что машина трудится, "не покладая мотора", до позднего вечера - другое дело, что туда поздно вечером только и прорвешься smile.gif ...

Сейчас подумываем- не лучше ли купить люминесцентный "имидж-анализатор", чтобы обходиться без пленки и сразу, если нужно, обсчитывать интенсивности. Правда, доверия у меня к этим интенсивностям... но как "картинка", видимо, не хуже пленки. Есть какая-то "экспертная оценка" таких камер?
guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость



 прочитанное сообщение 23.10.2011 12:24     Сообщение для модератора       

У нас такая колымага стоит, только старая(лет 5-6) они устаревают за 3 года (цифровой век, мля). Ей мало кто пользуется, ибо она тоже, как ваша проявочная машина, коллективная, а людям удобнее у себя под боком пленку проявить. Работает она нормально, единственный к ней претензий - разрешение каку веб-камеры, при увеличении - квадратики лезут. Но современные такие машинки у них с разрешением получше.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): DK.
Участник оффлайн! Serpent
Постоянный участник
RU-->IT



 прочитанное сообщение 24.10.2011 17:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

У нас на кампусе тоже таких машин понаставили, по 1 на этаж - BioRad ChemiDoc XRS+. ИМХО удобно, да и подходит для всего - хошь блоты, хошь кумасси всякие, хошь вообще агарозные гели туда суй... Я лично теперь в темную комнату на старый фильм процессор ходить перестал, но отдельные закоренелые ретрограды еще проявляют блоты по старинке.
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 24.10.2011 17:42     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail

Если уж ДК так претит пользоватся чернилами пусть купить у Стратагена флуоресцентную ленту.....
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 24.10.2011 21:49     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Serpent @ 24.10.2011 16:20)
Ссылка на исходное сообщение  У нас на кампусе тоже таких машин понаставили, по 1 на этаж - BioRad ChemiDoc XRS+. ИМХО удобно, да и подходит для всего - хошь блоты, хошь кумасси всякие, хошь вообще агарозные гели туда суй...
-у нас собираются покупать LAS-4010 (GE Life Sciences), вроде практически то же самое. Жаль, эпи- УФ еще нет там, для флюоресценции на блотах или ТСХ: но это уже другой класс прибора, охлаждения требует.
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 24.10.2011 22:05     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Tom1 @ 24.10.2011 16:42)
Ссылка на исходное сообщение  Если уж ДК так претит пользоватся чернилами пусть купить у Стратагена  флуоресцентную ленту.....
-а что с флюоресцентной лентой делать - ее же еще и возбуждать confused.gif ? Наверно, люминесцентной?
Не, чернилами не претит - просто если писать чернилами, то хочется ближе к "первоисточнику: НЦ мембране." Например, наносят в углы точку "Night Light" - такая суспензия в сосуде с носиком, чтобы разрисовывать всякое разное (вроде стен и потолков) люминесцирующими изображениями. Вот и вспомнил "слухи", что существует что-то типа такого карандаша - для блотов.

Сообщение было отредактировано DK. - 25.10.2011 21:02
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 10.11.2011 10:36     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Знает или хоть догадывается кто-нибудь, что за "зверь" NuPAGE antioxidant от Invitrogen? - который нужно вносить не только в образец, но и в верхний буфер. По "аромату" не ДТТ и не меркаптоэтанол...
Участник оффлайн! Serpent
Постоянный участник
RU-->IT



 прочитанное сообщение 10.11.2011 17:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(DK. @ 10.11.2011 08:36)
Ссылка на исходное сообщение  Знает или хоть догадывается кто-нибудь, что за "зверь" NuPAGE antioxidant  от Invitrogen? - который нужно вносить не только в образец, но и в верхний буфер. По "аромату" не ДТТ и не меркаптоэтанол...


Может, TCEP?
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 10.11.2011 18:35     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail

Скорее всего.
Участник оффлайн! bee1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  10.11.2011 20:17     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

http://www.gelifesciences.com/aptrix/upp01...moduleid=168009
Участник оффлайн! bee1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 10.11.2011 20:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

попробовал горизонтальные кассеты Генерального Електрика для вестерна smile.gif
работают прекрасно , но "подсаживают" источник питания smile.gif
160 в0лт нужно поболее ампер smile.gif
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.11.2011 00:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Serpent @ 10.11.2011 16:37)
Ссылка на исходное сообщение  Может, TCEP?
- да вроде если мне память и нюх не изменяют, ТСЕР практически без запаха, а этот... денатуратом, что ли, попахивает.
Пишут,что он мигрирует с белками - но зачем-то его добавляют и в верхний буфер, а не только в сампл - буфер. Несовместим с"химией" других гелей, да еще " proprietary".
Правда, Кайяджен свой раствор бетаина тоже так загадочно назвал "раствор Ку" - может, и здесь такой же proprietary...
Участник оффлайн! bee1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.11.2011 02:53     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(DK. @ 11.11.2011 01:20)
Ссылка на исходное сообщение  - да вроде  если мне память и нюх не изменяют, ТСЕР практически  без запаха, а этот... денатуратом, что ли, попахивает.
Пишут,что он мигрирует с белками - но зачем-то его добавляют и в верхний буфер, а не только в сампл - буфер. Несовместим с"химией" других гелей, да еще  " проприетары".
Правда, Кайяджен свой раствор бетаина тоже так загадочно назвал "раствор Ку" - может, и здесь такой же проприетары...

в кассетах Генерального Електрикса тока был преран - 15 минут - ты что - до сих пор вертикали ставишь smile.gif ?
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.11.2011 09:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(bee1 @ 11.11.2011 01:53)
Ссылка на исходное сообщение  в кассетах Генерального Електрикса тока был преран - 15 минут - ты что - до сих пор вертикали ставишь smile.gif  ?
-ага, от добра добра не ищут. Вряд ли в в горизонтали ТСЕР пахнет иначе smile.gif . Или лучше совместим с "химией". Мой вопрос, что у них нам за зверь confused.gif , а не по какому - вертикальному или горизонтальному треку ему бегать.
(bee1 @ 10.11.2011 19:21)
Ссылка на исходное сообщение  попробовал горизонтальные кассеты Генерального Електрика для вестерна smile.gif
работают прекрасно , но "подсаживают" источник питания smile.gif
160 в0лт нужно поболее ампер smile.gif
- ну и что: у Био-рада 200 вольт полчаса, току все равно, горизонтально или как smile.gif

Сообщение было отредактировано DK. - 11.11.2011 10:03
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 15.11.2011 00:17     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Люминесцирующая суспензия "Night Light", дйствительно, оказалась удобным и недорогим вариантом для маркировки углов блота. И как другой вариант еще понравилось наносить сразу после переноса в углы блота любые "не относящиеся к делу" антитела, конъюгированные с пероксидазой - никакой сдвиг тогда не поблема.
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 23.11.2011 21:57     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Есть здесь у нас "черный лист" компаний, у кого не стоит покупать первичные антитела? давненько не приходилось блоттинг ставить, память "девичья", да и качество работы компаний со временем меняется - а сейчас обнаружилось, что от Санта Круз одно моноклональное антитело работает очень прилично, а другое, к тому же самому антигену, но другому эритопу не узнает положительный контроль не только в 5% молоке (как рекомендовано производителем), но и просто в Т-ТВS с всего-то 0.05% твином. Хотя ожидался бы огромный фон - но его нет, и на том спасибо smile.gif .
А вот все три антитела от ENZO работают с первой же попытки- никакой оптимизации не потребовалось. Хорошо бы знать текущее положение дел, кто "не совсем добросовестные производители"... frown.gif или тем более совсем не.
Участник оффлайн! bee1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 23.11.2011 22:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(DK. @ 23.11.2011 22:57)
Ссылка на исходное сообщение  Есть здесь у нас "черный лист" компаний, у кого не стоит покупать первичные антитела? давненько не приходилось блоттинг ставить, память "девичья", да и качество работы компаний со временем меняется - а сейчас обнаружилось, что от Санта Круз одно  моноклональное антитело работает очень прилично, а другое, к тому же самому антигену, но другому эритопу не узнает положительный контроль не только в 5% молоке (как рекомендовано производителем), но и просто в Т-ТВС с всего-то 0.05% твином. Хотя ожидался бы огромный фон - но его нет, и на том спасибо smile.gif .
А вот все три антитела от ЕНЗО работают с первой же попытки- никакой оптимизации не потребовалось. Хорошо бы знать текущее положение дел, кто "не совсем добросовестные производители"... frown.gif  или тем более совсем не.


мнеб твои проблемы smile.gif попробуй найди антитела
для хроматин иммуноприципитации (ЧиП) smile.gif
Участник оффлайн! bee1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 23.11.2011 22:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(DK. @ 23.11.2011 22:57)
Ссылка на исходное сообщение  Есть здесь у нас "черный лист" компаний, у кого не стоит покупать первичные антитела? давненько не приходилось блоттинг ставить, память "девичья", да и качество работы компаний со временем меняется - а сейчас обнаружилось, что от Санта Круз одно  моноклональное антитело работает очень прилично, а другое, к тому же самому антигену, но другому эритопу не узнает положительный контроль не только в 5% молоке (как рекомендовано производителем), но и просто в Т-ТВС с всего-то 0.05% твином. Хотя ожидался бы огромный фон - но его нет, и на том спасибо smile.gif .
А вот все три антитела от ЕНЗО работают с первой же попытки- никакой оптимизации не потребовалось. Хорошо бы знать текущее положение дел, кто "не совсем добросовестные производители"... frown.gif  или тем более совсем не.


антитела , которые не работают на вестерне - это вроде байки едак 20-летней давности smile.gif
Участник оффлайн! DK.
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 24.11.2011 10:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(bee1 @ 23.11.2011 21:55)
Ссылка на исходное сообщение  антитела , которые не работают на вестерне - это вроде байки едак 20-летней давности  smile.gif
- если "вроде", то "таки да". И что за страсть у насекомого -во всех темах "отметиться", воображая себя четвероногим на выгуле... mad.gif
Что до иммунопреципитации хроматина - антитела anti- acetyl-H3 и anti- acetyl-H4 от Upstate Biotechnology работали у нас вполне достойно, и точно менее 20 лет тому назад tongue.gif .Можно внести в положительный список - если они все еще существуют. Сейчас ActiveMotif эту грядку окучивает.

Сообщение было отредактировано DK. - 24.11.2011 10:45
Участник оффлайн! dariakha




 прочитанное сообщение 03.03.2012 11:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Уважаемые коллеги, подскажите, пожалуйста, рентгеновской пленкой каких фирм можно пользоваться для детекции хемилюминесценции после проявления блота ECL Plus (Amersham). Обязательно ли покупать Hyperfilm ECL (Amersham), или рентгеновские пленки других фирм дают сравнимые результаты? Поделитесь, пожалуйста, опытом. Заранее спасибо!
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 05.03.2012 15:42     Сообщение для модератора       

Мы не пользуемся ECL+. А в других случаях подходит любая высокочувствительная(медицинская) рентген пленка с чувствительность 700-1500р-1 Кодак(Дюпон), Сеа(АГФА) РЕНТ(Восточная германия) и Даже ТАСМА и СВЕМА
Участник оффлайн! dariakha




 прочитанное сообщение 11.03.2012 11:51     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(guest: ммм @ 05.03.2012 16:42)
Ссылка на исходное сообщение  Мы не пользуемся ECL+. А в других случаях подходит любая высокочувствительная(медицинская) рентген пленка с чувствительность 700-1500р-1 Кодак(Дюпон), Сеа(АГФА) РЕНТ(Восточная германия) и Даже ТАСМА и СВЕМА

Большое спасибо! А чем вы проявляете блот?
guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость



 прочитанное сообщение 11.03.2012 12:53     Сообщение для модератора       

--Большое спасибо! А чем вы проявляете блот?

Люминол/пара-кумаровая кислота - это обычный ECL.
Участник оффлайн! dariakha




 прочитанное сообщение 11.03.2012 16:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(guest: ммм @ 11.03.2012 13:53)
Ссылка на исходное сообщение  --Большое спасибо! А чем вы проявляете блот?

Люминол/пара-кумаровая кислота - это обычный ECL.

Еще раз спасибо! А у меня еще вопрос: не подскажете пропись проявителя и закрепителя для пленки? Или посоветуете, какие купить готовые? Я нашла несколько прописей проявителя и закрепителя, но не знаю, какие лучше использовать - собираюсь использовать ЕСL кит в первый раз.
guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость



 прочитанное сообщение 11.03.2012 21:06     Сообщение для модератора       

Купите любой готовый проявитель и фиксаж от кодака для рентген пленки.
Для проявителя нужен метол, гидрохинон, сульфит натрия, сода кальценированная, бромистый калий. У вас все это есть в наличии? Если вам знакомы прописи проявителя Д19 или Р-2 то они оба подходят, фиксаж может быть любой.
Участник оффлайн! dariakha




 прочитанное сообщение 13.03.2012 17:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(guest: ммм @ 11.03.2012 22:06)
Ссылка на исходное сообщение  Купите любой готовый проявитель и фиксаж от кодака для рентген пленки.
Для проявителя нужен метол, гидрохинон, сульфит натрия, сода кальценированная, бромистый калий. У вас все это есть в наличии? Если вам знакомы прописи проявителя Д19 или Р-2 то они оба подходят, фиксаж может быть любой.

Спасибо!
Участник оффлайн! Umo4ka




 прочитанное сообщение 15.03.2012 19:56     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Господа! Мы с коллегой поставили блот, проявили ECL+, получили банды. Черные, слабоватые, но жить можно. Где ждали и еще кое-где, но вполне объяснимо. И белые. Там где должны были быть черные. Ну или не совсем там (мы ищем сразу несколько гистонов в смеси). И фон, довольно сильный. Я считаю, что надо пожиже АК развесть (возможно оба, но уж первичный - наверняка). Коллега считает наоборот, нужно повышать концентрацию. Пожалуйста смейтесь или не смейтесь, но рассудите!
guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость



 прочитанное сообщение 16.03.2012 07:25     Сообщение для модератора       

АК - это автомат Калашникова? smile.gif

С белыми бандами у комдива Чапаева разговор короткий.
Участник оффлайн! Umo4ka




 прочитанное сообщение 16.03.2012 10:45     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Смеяться, право, не грешно...
АК - это антитело ( Antikörper). Банд - это полоска такая на мембране, там где белок сидит двумя антителами распознанный.... tongue.gif
Участник оффлайн! chambermaid




 прочитанное сообщение 03.05.2012 14:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Здравствуйте! Помогите советом! Ставлю блот - все идет нормально, но когда проявляю у меня один засвет на пленках((( Я уже коньюгат и сыворотку титровала, хорошо отмывала мембрану, но все же пленки у меня получаются черными. В чем может быть дело??? Спасибо.
guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость



 прочитанное сообщение 03.05.2012 18:46     Сообщение для модератора       

1)Вы пользуетесь засвеченной пленкой. Или к примеру ваш фиксаж не работает.
2)Ваши антитела первые или вторые не видят антигена(возможно что его и нет на самом деле)
3) высокий уровень неспецифики.
Участник оффлайн! marys
Участник



 прочитанное сообщение 31.07.2013 11:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Подскажите, пожалуйста, кто-нибудь использовал лимонную кислоту после окраски ТМБ (для стабилизации окраски)? если да, то в какой концентрации и на какое время?
guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость



 прочитанное сообщение 31.07.2013 12:12     Сообщение для модератора       

--Подскажите, пожалуйста, кто-нибудь использовал лимонную кислоту после окраски ТМБ (для стабилизации окраски)? если да, то в какой концентрации и на какое время?

А вы не путаете ИФА и Western? Боюсь лимонка навредить может. Может ссылку дадите откуда дрова. Нафиг ее стабилизировать под сканер и все дела. Неделю она точно держится.
Участник оффлайн! Atfatra




 прочитанное сообщение 24.04.2014 01:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Всем доброго времени суток. Перед вопрос поискал на форуме, не нашел, поэтому пишу здесь.


Подскажите, кто как обрабатывает статистически изображения блотов. Интересует именно момент "получения циферки". Дальше все понятно. Я пытаюсь делать это в ImageJ, но у меня возникают немалые сложности.

1) Самое неприятное, я не могу добиться статистически значимых результатов на блоте, который "глазами" кажется явно имеет различия в количестве белка на дорожке. Сразу оговорюсь, разница все-таки не в десятки раз, но на ощутимое количество прцентов (на глаз, конечно). На показательно чистом и красивом блоте это было бы не сложно, но где же его взять...

2) Смущает субъективность, которую так или иначе вносишь при ручной обработке каждой дорожки. Хотя, как следует из пункта 1) пока она мне не грозит - я даже при желании "честно" не могу добиться нужного мне результата.


В общем, прошу совета кто чем пользуется, какими функциями обработки итп итд, вдруг я чего-то еще не пробовал smile.gif

Спасибо



Добавлено:
Согласен, надо было описать чуть корректней. На одном блоте есть по 4-6 образцов одного типа и столько же второго. Хочется получить "число" интенсивности для каждого и сравнить две группы на стат разницу.

Пероксидаза --> рентгеновская пленка --> обычный сканер

Сообщение было отредактировано Atfatra - 24.04.2014 12:13
guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость



 прочитанное сообщение 24.04.2014 04:41     Сообщение для модератора       

Вы просто хотите сравнить образец А и Б или вас интересует именно количество? Каким именно способом вы получаете окраску(фермент? Субстрат?). Каким способом вы получаете цифровое изображение?
Участник оффлайн! Shalty




 прочитанное сообщение 27.11.2014 01:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Здравствуйте!При проведении WB возникла следующая проблема:после проявки на пленке видно буквально все белки, что были в геле и перенеслись на мембрану (используем клеточный лизат). Пробовали блоты для разных белков, а,значит, с использованием разных первичных АТ, везде одна и та же проблема. Более того, один раз забылись и использовали protein ladder для SDS, так соответствующие полосы все проявились на пленке. Пробовали менять все буферы и ECL-результат тот же. Блокируем 5% BSA, еще 2 месяца назад с теми же реагентами все работало, не было этого чудовищного бэкграунда. С чем может быть связано такое обилие неспецифического взаимодействия? И как его избежать??
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 27.11.2014 06:57     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Обычно такая картина возникает при перегрузке вторых антител. Иногда при перегрузке первых, особенно если они поликлональные.

Если у вас ничего не менялось, а резльтаты поменялись, то это значит, что у вас есть баг, но вы его не видите. При таком подходе невозможно его найти без тщательного расследовния.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 28.03.24 16:14
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft